Consulte esta tabela para obter as absorbâncias em vários comprimentos de onda para as fases móveis usadas com frequência.
Para reduzir o ruído da linha de base, escolha a fase móvel com cuidado.
A melhor fase móvel para a sua aplicação é aquela que é transparente nos comprimentos de onda de detecção escolhidos. Com uma fase móvel como essa, certifique-se de que nenhuma absorbância seja causada apenas pela amostra. A absorbância pela fase móvel também reduz a faixa dinâmica linear do detector pela quantia de absorbância que a função Autozero (Zero automático) cancela. O comprimento de onda, o pH e a concentração da fase móvel afetam sua absorbância. Na tabela abaixo são fornecidos exemplos de diversas fases móveis, onde as absorbâncias são baseadas em um comprimento de caminho de 10 mm.
Aviso: Ao operar o Alliance iS Bio HPLC System acima do pH 10, certifique-se de utilizar o kit opcional de pH alto. Para obter mais assistência, entre em contato com a Waters.
Tabela 1.
Absorbância da fase móvel medida com relação ao ar ou à água
| Fase móvel |
Absorbância (AU) a um comprimento de onda específico (nm) |
| 200 |
205 |
210 |
215 |
220 |
230 |
240 |
250 |
260 |
280 |
| Solventes |
| ACN |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
0,01 |
0,01 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| IPA |
1,80 |
0,68 |
0,34 |
0,24 |
0,19 |
0,08 |
0,04 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
| MeOH (desgaseificado) |
1,91 |
0,76 |
0,35 |
0,21 |
0,15 |
0,06 |
0,02 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
| MeOH (não desgaseificado) |
2,06 |
1,00 |
0,53 |
0,37 |
0,24 |
0,11 |
0,05 |
0,02 |
<0,01 |
n/d |
| THF não estabilizado (novo) |
2,44 |
2,57 |
2,31 |
1,80 |
1,54 |
0,94 |
0,42 |
0,21 |
0,09 |
0,05 |
| THF não estabilizado (antigo) |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
2,5 |
1,45 |
| Ácidos e bases |
| Ácido acético, 1% |
2,61 |
2,63 |
2,61 |
2,43 |
2,17 |
0,87 |
0,14 |
0,01 |
<0,01 |
n/d |
| Fosfato de diamônio, 50 mM |
1,85 |
0,67 |
0,15 |
0,02 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| EDTA dissódico, 1 mM |
0,11 |
0,07 |
0,06 |
0,04 |
0,03 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
| Ácido clorídrico, 0,1% |
0,11 |
0,02 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Ácido fosfórico, 0,1% |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Trietilamina, 1% |
2,33 |
2,42 |
2,50 |
2,45 |
2,37 |
1,96 |
0,50 |
0,12 |
0,04 |
<0,01 |
| Ácido trifluoroacético, 0,1% |
1,20 |
0,78 |
0,54 |
0,34 |
0,22 |
0,06 |
< 0,02 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
| Tampões e sais |
| Acetato de amônio, 10 mM |
1,88 |
0,94 |
0,53 |
0,29 |
0,15 |
0,02 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
| Bicarbonato de amônio, 10 mM |
0,41 |
0,10 |
0,01 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| HEPES, 10 mM, pH 7,6 |
2,45 |
2,50 |
2,37 |
2,08 |
1,50 |
0,29 |
0,03 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
| MES, 10 mM, pH 6,0 |
2,42 |
2,38 |
1,89 |
0,90 |
0,45 |
0,06 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
| Fosfato de potássio, dibásico (K2HPO4), 10 mM |
0,53 |
0,16 |
0,05 |
0,01 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Fosfato de potássio, monobásico (KH2PO4), 10 mM |
0,03 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Acetato de sódio, 10 mM |
1,85 |
0,96 |
0,52 |
0,30 |
0,15 |
0,03 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
| Cloreto de sódio, 1 M |
2,00 |
1,67 |
0,40 |
0,10 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Citrato de sódio, 10 mM |
2,48 |
2,84 |
2,31 |
2,02 |
1,49 |
0,54 |
0,12 |
0,03 |
0,02 |
0,01 |
| Formiato de sódio, 10 mM |
1,00 |
0,73 |
0,53 |
0,33 |
0,20 |
0,03 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
| Fosfato de sódio, 100 mM, pH 6,8 |
1,99 |
0,75 |
0,19 |
0,06 |
0,02 |
0,01 |
0,01 |
0,01 |
0,01 |
<0,01 |
| Tris HCl, 20 mM, pH 7,0 |
1,40 |
0,77 |
0,28 |
0,10 |
0,04 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Tris HCl, 20 mM, pH 8,0 |
1,80 |
1,90 |
1,11 |
0,43 |
0,13 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Tensoativos |
|
| Brij 35, 1% |
0,06 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
| CHAPS, 0,1% |
2,40 |
2,32 |
1,48 |
0,80 |
0,40 |
0,08 |
0,04 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
| Monolaurato de polioxietileno sorbitano (Tween 20), 0,1% |
0,21 |
0,14 |
0,11 |
0,10 |
0,09 |
0,06 |
0,05 |
0,04 |
0,04 |
0,03 |
| Dodecilssulfato de sódio (SDS), 0,1% |
0,02 |
0,01 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| Triton X-100, 0,1% |
2,48 |
2,50 |
2,43 |
2,42 |
2,37 |
2,37 |
0,50 |
0,25 |
0,67 |
1,42 |
| Reagentes PIC Waters |
| PIC A, 1 ampola/L |
0,67 |
0,29 |
0,13 |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
<0,01 |
| PIC B6, 1 ampola/L |
2,46 |
2,50 |
2,42 |
2,25 |
1,83 |
0,63 |
0,07 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
| PIC B6, UV baixo, 1 ampola/L |
0,01 |
<0,01 |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
n/d |
| PIC D4, 1 ampola/l |
0,03 |
0,03 |
0,03 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
Cortes de comprimento de onda para fases móveis mistas
